葡聚糖凝膠的手工操作方法

 　　葡聚糖凝膠的手工操作方法：

　　一般剛拿到手的Sephadex G/葡聚糖凝膠為干粉顆粒。用前，可以用20倍體積的雙蒸水泡過夜。或者沸水煮2-4個小時。記得補水。這樣Sephadex G/葡聚糖凝膠基本就泡好了。

　　葡聚糖凝膠泡好后，將柱子準備好(下篩板裝好)，先用水沖洗兩次。將凝膠混勻(凝膠濃度要適當，太稀會灌得很慢，而太濃的話容易產生氣泡，一般1體積的膠，2-3體積的水就可以)，輕輕倒入柱中，等柱中液面下降一些后，立刻補加，等膠體積灌得差不多時，靜置，讓膠*沉下后，再小心安置上篩板(上篩板不太好安，但多安幾次還是能夠安好的。可以先裝上篩板浸濕，輕輕斜蓋在上口，用吸頭壓入，關鍵是不能把氣泡擠入。再蓋平，此時如果篩板上有小量的膠，可以加水混勻再吸走)。此時不停的加水或者其他的緩沖液，不能讓柱子干了，如果干了，前面的工作就前功盡棄了，得重新灌了。

　　如果有條件，可以用藍色葡聚糖(1mg/ml)檢測一下柱子是否灌得均勻。檢測方法與樣品的過柱方法相同。

　　檢測合格后，就可以上樣了。樣品保證沒有沉淀，如果有的話，可以離心或者過濾去除。

　　等上篩板上的液體流完，將合適的樣品量(不超過柱體積的1/10為好)全倍加入，自然流干。再加少量緩沖液，如0.5ml或者1ml，等流完再加少量緩沖液，如此三次后，就可以多加，或者一直加懣到柱口。

　　如果下面接了檢測器的話就好辦，如果沒有檢測器，而目標樣品有顏色，也比較好收集，如果又沒有檢測器，又沒有顏色，可能得分段收集了，這個誰也偷不得懶。

　　等樣品收集完，就是沖上20倍柱體積的緩沖液或者水，讓小分子物質也流出來，柱子得到再生(這個可以反向沖洗，也就是將柱子倒過來，從出口加入緩沖液，這個可以接一個合適的軟管，用一個橈杯接了水放到高處，利用重力自然往下流)。

　　葡聚糖凝膠的再生和保存

　　凝膠層析的載體不會與被分離的物質發生任何作用，因此凝膠柱在層析分離后稍加平衡即可進行下一次的分離操作。但使用多次后，由于床體積變小，流動速率降低或雜質污染等原因，使分離效果受到影響。此時對凝膠柱需進行再生處理，其方法是:先用水反復進行逆向沖洗，再用緩沖溶液平衡，即可進行下一次分離。

　　對使用過的凝膠，若短時間保存，只要反復洗滌除去蛋白質等雜質，加入適量防腐劑即可;若長期保存，則需將凝膠從柱中取出，進行洗滌、脫水和干燥等處理后，裝瓶保存。