CCK8試劑盒日本同仁的檢測步驟

 　　CCK8試劑盒日本同仁利用了同仁化學研究所(Dojindo)開發的四唑鹽——WST-8 (2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽)，它在電子載體1-Methoxy PMS存在的情況下能夠被還原成水溶性的甲臜染料。CCK-8溶液可以直接加入到細胞樣品中;不需要預配各種成分。CCK-8法是用于測定細胞增殖或細胞毒性試驗中活細胞數目的一種高靈敏度，無放射性的比色檢測法。CCK-8被細胞內脫氫酶生物還原后生成的橙色甲臜染料能夠溶解在組織培養基中，生成的甲臜量與活細胞數量成正比。WST-8法檢測細胞增殖、細胞毒性實驗的靈敏度比其它四唑鹽如MTT, XTT, MTS或WST-1高。由于CCK-8溶液相當穩定，并且對細胞沒有毒性，因此可以長時間孵育。

　　CCK8試劑盒日本同仁檢測步驟

　　1. 向各孔中加入100 μl細胞懸液。a)

　　2. 在37℃下預孵育培養板。b)

　　3. 向各孔中加入各濃度的待測溶液c)10 μl。

　　4. 37℃下孵育。

　　5. 向各孔中加入10 μl的CCK-8溶液d)。

　　6. 37℃下孵育1-4小時。e)

　　7. 測定450 nm處的OD值。

　　a) 使用適當的培養基制備50,000-100,000個/ml的細胞懸液。

　　b) 建議使用CO2培養箱guo夜預培養。

　　c) 使用培養基或PBS來制備溶液。

　　d) 如果待測溶液有還原性，測定不含細胞，但含有CCK-8的待測溶液在450 nm處的空白吸光度。如果該吸光度很小，則可以直接加入CCK-8 ，如果吸光度相對較大，則需要除去培養基，并用培養基洗滌細胞兩次，然后加入新的100 μl培養基和10 μl CCK-8進行檢測。

　　e) 白細胞可能需要培養較長時間。